本文參照《GB 31658.2-2021 食品安全國家標準 動物性食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，利用EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）進行淨化，再用高效液相色譜串聯質譜檢測進行檢測，建立了一種對水日本成人APP91视频中氯黴素的分析方法。

關鍵詞：

水日本成人APP91视频，氯黴素，固相萃取，

1，  實驗過程

1.1     儀器與試劑   

SPE1000 全自動固相萃取係統，北京91视频一区二区三区儀器股份有限公司；

M64高通量平行濃縮儀，北京91视频一区二区三区儀器股份有限公司；

4500質譜係統，SCIEX公司；

EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠  ；  

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

正己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

氯化鈉（分析純），購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2                      工作液配製

氯黴素標準儲備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購自壇墨質檢標準物質中心 。

氯黴素-D5標準儲備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購自壇墨質檢標準物質中心 。

標準中間液:移取氯黴素儲備液和氯黴素-D5標準儲備液各0.1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配製成濃度為1.0μg/mL的氯黴素標準中間液及氯黴素-D5同位素標準中間液。

標準使用液:移取氯黴素中間液和氯黴素-D5標準中間液各1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配製成濃度為0.1μg/mL的氯黴素標準使用液及氯黴素-D5同位素標準使用液。

分別移取0.1μg/mL的氯黴素標準使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分別置於10mL容量瓶中並加入氯黴素-D5同位素標準使用液0.2 mL以純水定容至刻度，標準濃度為0 μg/L、0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、2μg/L、5μg/L， 氯黴素-D5濃度固定為2μg/L。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品製備

 取魚肉5g，加氯黴素-D5同位素標準使用液0.2 mL、乙腈5mL、4%氯化鈉溶液5mL，渦旋振蕩2min，4000r/min離心10min，取上清液，殘渣重複提取1次，合並上清液。加正己烷5mL,渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，棄去上層液，正己烷重複處理1次。加水飽和的乙酸乙酯溶液5mL,渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，上層液轉移到20mL上樣瓶中，重複提取1次，合並提取液，氮氣吹幹，加3mL5%乙腈水溶液溶解，混勻，備用待淨化。

1.3.2 固相萃取淨化 

EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）用10mL甲醇、10mL水依次進行活化，取1.3.1待淨化液上樣，上樣結束後用3mL、3mL水淋洗萃取柱，再用4mL 50%甲醇水溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液，加水飽和乙酸乙酯4mL，渦旋振蕩1min，2000r/min離心5min，取上層液，重複處理1次，合並上層溶液，氮氣吹至近幹幹。加1mL 50%甲醇水溶液溶解，混勻過微孔濾膜後供LC-MS/MS測定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測方式：多反應監測（MRM）；

流動相：A:水-B: 甲醇（50:50）；

流速：0.2mL/min；

進樣量：1μL；

2，                      實驗結果

圖1 標液色譜圖

圖2氯黴素標準曲線圖

3，                      結論 

本次實驗展示了使用EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）對水日本成人APP91视频中氯黴素進行淨化，通過高效液相色譜串聯質譜進行測定，其加標回收率在84.7%~105.2%之間，RSD在8.1%，能夠滿足標準要求。說明EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）能很好的完成方法中的淨化工作，並且結果穩定、可靠。

4，                      參考文獻

1.       《GB 31658.2-2021 食品安全國家標準 動物性食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》

表 1   加標回收率結果