SPE固相萃取-液相色譜串聯質譜法測定動物源食品中的氯黴素

前言

氯黴素曾廣泛用於治療各種敏感菌感染，後因對造血係統有嚴重不良反應，故對其臨床應用現已做出嚴格控製。氯黴素可用於傷寒、副傷寒和立克次體病等及敏感菌所致的嚴重感染。氯黴素在腦脊液中濃度較高，也常用於治療其他藥物療效較差的腦膜炎患者。由於氯黴素可引起嚴重的毒副作用，所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動固相萃取係統對牛肉中的氯黴素進行固相萃取富集，用高效液相色譜質譜儀進行檢測。

本文參考“農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法”采用SPE1000全自動固相萃取係統，測定氯黴素的回收效果，實驗證明，氯黴素回收率在90.2%~99.5%之間，重現性RSD為3.5%，回收率和重現性良好，說明SPE1000全自動固相萃取係統可靠、穩定，適用於動物源食品中的氯黴素樣品前處理。

關鍵詞：氯黴素，SPE1000全自動固相萃取係統，液相色譜串聯質譜， 

1實驗過程

1.1儀器與試劑

SPE1000全自動固相萃取係統（91视频一区二区三区公司）；

SCIEX 4500 液相色譜串聯質譜（SCIEX）；

氯黴素，100 mg/L，壇墨質檢；

氯黴素D5，100 mg/L，壇墨質檢；

氯化鈉（分析純）；

正己烷（色譜純）；

乙酸乙酯（色譜純）；

乙腈（色譜純）；

C18固相萃取柱，（1000 mg/6 mL91视频一区二区三区）；

實驗用水：超純水。

1.2標準工作液的配製

取1 mL氯黴素標品於10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。

取100 μL 的氯黴素標準儲備液，用甲醇定容到10 mL，配製成0.1 μg/mL標準工作液。

取1 mL氯黴素D5標品於10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。

取100 μL 的氯黴素D5標準儲備液，用甲醇定容到10 mL，配製成0.1 μg/mL標準工作液。

1.3試驗方法

1.3.1樣品準備

取均質後的樣品5g置於50mL離心管中，加入內標200μL，氯黴素標液200μL,加入乙腈5mL，4%氯化鈉5mL，渦旋2min，4000rad/min離心10min，取上清液至另一個50mL離心管中，重複提取一次，合並提取液。提取液中加入正己烷5mL，渦旋2min，2000rad/min離心10min，棄去上層清液，重複一次，加入水飽和乙酸乙酯5mL，渦旋1min，2000rad/min離心10min，將上層液轉移到15mL離心管中，重複提取一次，合並提取液氮吹至幹，用水：乙腈（95:5）5mL溶解，備用。

同時做樣品空白，加入內標200μL，剩下同樣品處理 。

1.3.2 固相萃取及濃縮

按照圖1所示的方法進行SPE1000方法編輯，並加載方法到相應通道，進行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至幹，用1 mL流動相定容。

圖1   氯黴素的SPE富集方法

1.3.3 UPLC-MS測定牛肉中氯黴素

液相條件：

色譜柱：C18，5 μm，4.6 mm*100mm； 

流    速：0.2 mL/min ；

進樣量：5 μL；

流動相：乙腈：水=40:60;

MS條件：

氣簾氣~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  噴霧電壓-4500V

表1  氯黴素母離子/子離子(定量例子152.0)

2試驗結果

2.1牛肉中氯黴素色譜圖

2.1.1牛肉中氯黴素標品色譜圖

圖2為取200 μL的氯黴素標準工作液和200μL氯黴素內標工作液，用流動相定容到1.0 mL檢測，氯黴素標品出峰色譜圖，出峰時間為 1.50min。

圖2  氯黴素標品出峰色譜圖

2.1.2牛肉中氯黴素樣品色譜圖

圖3氯黴素加標樣品出峰色譜圖，出峰時間為1.50min，圖4為空白樣品色譜圖。

圖3  氯黴素加標樣品出峰色譜圖

圖4   空白樣品色譜圖

2.2 UPLC-MS測定牛肉中氯黴素回收率

液質測定牛肉中氯黴素回收率計算結果如下表，萃取富集後的回收率在之間90.2%~99.5%，重現性RSD為3.5%。

表2  牛肉中氯黴素的加標回收率（加標量4 ug/kg）

3結果與討論

SPE1000全自動固相萃取係統淨化的樣品，其回收率在90.2%~99.5%,重現性為3.5%，準確度與平行性良好且自動化效率高，可應用於此類樣品的前處理方法中。

參考文獻

農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法